Qualificação de Mestrado: 28 de setembro de 2017
Local: SAT 02 ICB/UFPA
Horário: 14:30h

Título: CARACTERIZAÇÃO DO PADRÃO DE EXPRESSÃO E METILAÇÃO DO GENE P21CDKN1A/CIP1 EM TUMORES MAMÁRIOS CANINOS

Autora: Raissa Melo de Sousa

Resumo: A maioria dos tumores mamários caninos são malignos, fazendo com que o animal venha a óbito. Um dos fatores envolvidos nessa patogênese é a alteração no nível de expressão do gene P21, este por sua vez codifica uma proteína que pode inibir ou facilitar a iniciação e a progressão tumoral. Um evento que pode afetar o nível celular da proteína p21 é a metilação desse gene, podendo ocasionar um silenciamento gênico ou a uma superexpressão dele. Considerando a importância funcional desse gene, este estudo tem o objetivo de avaliar o perfil de metilação e expressão do gene P21 em tumores mamários de cadelas do estado do Pará, com o intuito de identificar marcadores moleculares de diagnóstico precoce, sobrevida e prognóstico. Para isso, 80 amostras de tecidos tumoral e não tumoral foram coletadas no Hospital Universitário Mário Dias Teixeira, em Belém.

O DNA e RNA de cada amostra foram extraídos utilizando kits específicos. Para as análises de metilação, o DNA obtido foi submetido ao processo de modificação, pela técnica de Bisulfite Sequencing PCR. Os resultados do sequenciamento serão analisados no software BiQ Analyzer para avaliar o padrão de metilação. Para a análise de expressão gênica, será realizada a quantificação do mRNA do gene-alvo utilizando a técnica de PCR em tempo real. Como controles constitutivos serão utilizados os genes RPL32 e HPRT. A maioria das amostras coletas foram extraídas e amplificadas com os iniciadores descritos, o tamanho dos fragmentos encontrados foram entre 300pb e 40 pb. Os resultados das análises de metilação serão comparados com os de expressão, bem como com os dados histopatológicos dos pacientes, utilizando os testes Exato de Fisher, Odds Ratio e Kruskal-Wallis no programa GraphPad Prism, com resultados significativos quando p <0,05.